实验技术
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人外周血 T 细胞分离方法
本节介绍从全血中分离外周血单个核细胞 (PBMC) 和pan T 细胞富集的方法。在分离 PBMC 时，可以使用多种不同的来源样品（如：全血、血沉棕黄层、白细胞减少系统室等）。 注意：所有步骤都应在层流环境中进行，使用适当的无菌技术。1.确…
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2xHeBS配制
HEPES-buffered saline (HeBS), 2× 1.称量配制以下组分至800 ml H2O: 16.36 g NaCl (mol. wt., 58.44; 0.28 M final)11.9 g HEPES (mol. w…
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CRISPR PX330 sgRNA质粒克隆构建方法
sgRNA design Figure 1. From Staying on target with CRISPR-Cas . Dana Carroll , Nature Biotechnology 31,807–809 (201…
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小鼠基因型PCR鉴定方法
1.将小鼠剪尾巴0.5~1cm左右。2.添加 200 µl Direct PCR 裂解缓冲液和 10 µl 蛋白酶 K（20mg/ml，-20 oC）。3.65 oC 孵育过夜。4.在 85 oC下加热样品 45 分钟以灭活蛋白酶 K。5.…
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AAV/Lenti滴度qPCR鉴定引物序列
引物名称 序列 Forward primer 5’-CCCACTTGGCAGTACATCAA-3’ Reverse primer 5’-GCCAAGTAGGAAAGTCCCAT-3’ 引物Blast结果： Sequence (5′…
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计算单位体积质粒的拷贝数（copy number）
第一步，计算质粒的分子量。假设一个DNA碱基对（bp）的平均重量为650道尔顿（Da），一摩尔的碱基对（bp）的重量为650克，即任何双链DNA模板的分子量可以通过取其长度（bp）与每个碱基对重量的乘积来估计。 First, …
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AAV纯化试剂配制和浓度
AAV碘克沙醇纯化法常用试剂配制浓度 5 M NaCl 146.1 g NaCl Up to 500 mL Ultrapure water 1 M Tris HCl (pH 8.5) 12.11 g Tris base Up to 100 …
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流式细胞仪（FACS）原理及其应用注意事项
流式细胞术(FCM)定义: FCM是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。 特点: 单细胞的流动的， 活细胞的 定量的，多参数的，高统计学精度的，分选细胞。 (一）仪器基本组成结构 …
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MFI: 用image J测量计算荧光染色的mean fluorescence intensity
1、加开图像后，提取出单一通道（Image-Color-Split Channels） 2、调整阈值，选择适当的区域（Image-Adjust-Threshold） 注意： 如果图片上有比例尺，必须调节Threshold，或者框选比例尺的区…
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噬菌体稀释和储存缓冲液配制SM Buffer
SM buffer 配方: 200 mM NaCl2 10 mM MgSO4 50 mM Tris-HCl, pH 7.5 配制过程： 1.称取 11.7 g NaCl2 和 1.4 g MgSO4 并添加到干净的 1L 蓝盖烧瓶或其他高压…
